Или Как правильно поставить диагноз и не пропустить неполадки в своем организме
Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.
Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.
После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.
ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.
Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:
Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.
Кстати
Метод ПЦР применяется не только в медицинских целях. В наши дни он используется и в иных сферах, например в криминалистике, в тех случаях, когда требуется определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. ПЦР иногда используется также при установлении отцовства.
У диагностики методом ПЦР много плюсов:
Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.
Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.
Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.
Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.
Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.
Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.
Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.
Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.
Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.
Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.
Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.
Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.
ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.
www.kp.ru
Кровь методом ПЦР чаще всего проверяют на вирусные инфекции.
Значительно реже там определяются бактерии: стафилококки, стрептококки, туберкулезные палочки.
Анализ крови методом ПЦР позволяет установить, есть ли инфекция в организме.
Тест очень чувствительный.
Он выявляет инфекционные заболевания на ранней стадии, когда антитела к возбудителям ещё не образуются.
Основные болезни, которые выявляют в крови:
При необходимости возможна количественная молекулярная диагностика методом ПЦР кровь.
Она позволяет понять, требуется ли пациенту лечение, какие нужны дозы и длительность курса терапии, приносят ли результат проводимые терапевтические мероприятия.
ПЦР крови на инфекции используется для лабораторного контроля их излеченности.
Рассмотрим основные заболевания, при которых используется исследование крови ПЦР.
ПЦР – один из методов диагностики туберкулеза.
С помощью лабораторного теста возможно выявление любых форм заболевания.
В том числе ранних, некультивируемых, с нетипичной локализацией возбудителя.
Методика имеет более высокую чувствительность, чем бактериологическое исследование.
Она очень информативна, так как позволяет проводить дифференциальную диагностику, отличая туберкулезные и нетуберкулезные микобактерии.
ПЦР обеспечивает их видовую и штаммовую идентификацию.
Особую ценность методика имеет при выявлении внелегочных форм туберкулеза.
Благодаря определению вида микобактерий, она дает возможность подобрать эффективную терапию.
Использование ПЦР для диагностики туберкулеза рекомендовано Министерством здравоохранения РФ, приказом №64 от 21 февраля 2000 года.
Для диагностики туберкулеза может использоваться любой биоматериал.
Это мокрота, кровь, пунктат лимфоузла, моча и т.д.
Кровь из вены для ПЦР сдают для дифференциальной диагностики ограниченных и диссеминированных форм туберкулеза.
Проще говоря, метод позволяет понять, находятся бактерии в ограниченном очаге, или уже проникли в кровь и разносятся по всему организму.
Часто ПЦР крови на микобактерии применяют у детей.
В том числе при отрицательных результатах бактериологического исследования.
Тем не менее, ПЦР крови имеет не очень высокую чувствительность.
Поэтому в клинической практике используется нечасто.
Наибольшая вероятность обнаружения ДНК в крови – у пациентов с ВИЧ или на фоне приема иммуносупрессивных препаратов.
У многих ПЦР дает отрицательные результаты даже в случае диссеминированных форм.
У женщин ДНК микобактерий определяют в менструальной крови.
Исследование проводится для диагностики туберкулеза половых органов.
Анализ делают на такие виды бактерий:
Для диагностики герпетической инфекции ПЦР крови применяется нечасто.
Обычно берут материал с поверхности высыпаний.
Но иногда их нет.
В таком случае исследование крови остаётся информативным методом диагностики заболевания.
Показания к проведению теста:
Однажды заразившись, человек навсегда становится носителем герпеса.
Но ДНК определяется в крови только в активную фазу инфекции.
При бессимптомном течении ПЦР дает отрицательные результаты.
ПЦР – в большей мере уточняющий метод при ВИЧ, нежели подтверждающий.
Для первичной диагностики обычно применяются серологические исследования.
В крови выявляют антитела и антигены к ВИЧ.
Иногда ПЦР применяют для установления диагноза.
Области применения метода:
Вполне вероятно, что она была сдана человеком в период, когда антитела ещё не образовались.
Поэтому выявление РНК может дать положительные результаты при отрицательных серологических исследованиях.
Если ребенок родился от матери, страдающей ВИЧ, его всегда обследуют.
В том числе если была проведена необходимая профилактика.
Но выявлять вирус серологическими методами нецелесообразно.
Потому что ребенок первых лет жизни содержит в крови материнские антитела.
Соответственно, они обязательно будут определены в ходе анализа, и не важно, болен ребенок или нет.
Серологические тесты всегда дадут положительный результат.
В такой ситуации на помощь приходит ПЦР.
Если РНК отсутствует, то ребёнок здоров.
На антитела кровь сдают только через 3 месяца после заражения.
Есть есть необходимость ранней диагностики, используют только ПЦР.
Такая необходимость возникает, если есть основания полагать, что человек инфицирован.
По симптомам этого обычно понять нельзя.
Потому что клинические проявления ВИЧ не специфичны: они такие же, как у множества респираторных вирусных инфекций.
Но бывает так, что симптомы появляются на фоне данных анамнеза, указывающих на высокий риск инфицирования.
Например, медицинский работник имел контакт с кровью ВИЧ-инфицированного.
Если через несколько недель у него появились симптомы инфекции, это повод для обследования крови на РНК ретровируса методом ПЦР.
ПЦР может применяться только вместе с анализом крови на антитела, но не вместо него.
Проблема этого исследования состоит в том, что оно может дать ложноотрицательные результаты, пусть и в небольшом количестве случаев.
Причины их следующие:
При этом ПЦР играет важнейшую роль в лечебном процессе.
Методика позволяет оценить вирусную нагрузку.
Она позволяет врачу понять, когда стоит назначать лечение, эффективно ли оно или нужно менять схему.
На фоне удачной терапии ПЦР крови на ВИЧ становится отрицательной.
При этом антитела по-прежнему сохраняются и могут выявляться в анализах.
Поэтому серологические методы малоинформативны в оценке эффективности терапии и не используются с этой целью.
Исследование крови на бактерии методом ПЦР проводят при тяжелых инфекциях:
Этиологическая диагностика позволяет врачу не только подтвердить бактериальную этиологию процесса.
Она дает возможность подобрать наиболее эффективные препараты для лечения.
Потому что при разных патологиях назначаются разные антибиотики.
Если стрептококковая инфекция чувствительна к большинству препаратов, в том числе бета-лактамным антибиотикам, то стафилококк часто резистентный ко многим лекарственным средствам.
ПЦР обычно делают качественную.
Оценивается факт присутствия бактерий в крови, а не их количество.
В крови определяют ДНК листерий и токсоплазм.
Это одноклеточные паразиты.
Листериозом чаще всего заражаются через еду.
Болезнь может давать осложнения, вызывать воспаление структур центральной нервной системы.
В группе риска – беременные, пожилые, лица с иммунодефицитом или онкозаболеваниями.
В большинстве же случаев листериоз протекает как кишечная инфекция.
Септическая его форма очень опасна и часто приводит к летальному исходу.
Токсоплазма – распространенная, не столь опасная инфекция.
Она представляет наибольшую угрозу для беременных.
Анализ назначается при:
Все беременные сдают анализ на токсоплазму.
Хотя обследуют их обычно при помощи серологических методов.
Болезнь часто манифестирует на фоне иммунодефицита.
ПЦР применяется с целью подтверждения диагноза.
При появлении клинических признаков или наличии анамнестических данных, указывающих на высокую вероятность этого заболевания, доктор назначает определение в крови РНК вируса.
Исследование очень чувствительно.
Поэтому может выявлять гепатит С в бессимптомной стадии.
Показания к назначению:
Количественная ПЦР проводится при:
До начала лечения ПЦР делают всем пациентам.
Знать исходную вирусную нагрузку врачу необходимо, чтобы:
Раньше для первичной диагностики заболевания применялись качественные тесты.
Дополнительно использовались количественные, которые делали перед началом лечения и в процессе проведения терапии.
Но сегодня количественная ПЦР имеет столь же высокую чувствительность, что и качественная.
Она позволяет определять вирус гепатита С в крови с нижним порогом чувствительности 10-15 МЕ/мл.
Благодаря внедрению ПЦР в разы уменьшилось количество биопсий печени, проводимых с диагностической целью.
Методика позволяет врачу наблюдать за течением заболевания и эффективностью терапии.
Оценивать вирусологическую нагрузку в динамике ВОЗ рекомендует одним и тем же выбранным методом.
Как правило, врач направляет одного пациента в одну и ту же лабораторию для проведения одного и того же теста.
Такой подход обеспечивает точность результата.
В том числе при определении устойчивого вирусологического ответа, свидетельствующего об эффективности проводимой терапии.
ПЦР позволяет выявить ДНК вируса гепатита В в различном биоматериале:
В рутинной практике используется анализ крови ПЦР на гепатит В.
Этот метод обладает самой высокой чувствительностью.
Иногда он незаменим в первичной диагностике.
Для установления диагноза гепатита В достаточно определения в крови антигенов и антител.
Но иногда инфекция протекает в скрытой форме.
Традиционно проводимые для установления первичного диагноза исследования могут давать отрицательные результаты.
При этом с помощью ПЦР удается выявить вирус.
Кроме того, ДНК возбудителя гепатита В является самым ранним маркером этого заболевания.
Она начинает определяться в крови раньше, чем антитела и антигены.
Благодаря ПЦР можно выявить форму заболевания, вызванную мутантными штаммами вируса.
Определение ДНК позволяет не только констатировать инфекцию.
Метод также дает возможность определять репликативную активность HBV.
ПЦР становится положительной ещё в инкубационный период.
В острый период заболевания количественные показатели увеличиваются.
ПЦР становится негативной уже в период ранней реконвалесценции.
Это позволяет врачу подтвердить излеченность с помощью данного метода.
Таким образом, области применения этого исследования следующие:
Анализ могут назначить пациентам, которые ранее переболели вирусным гепатитом В, а сейчас получают иммуносупрессивную терапию.
Потому что это фактор риска повторного возникновения заболевания.
Расшифровка результатов:
Если анализ отрицательный, это говорит о том, что человек здоров и не встречался с вирусом, либо излечен от гепатита В.
В результате успешной терапии ДНК полностью исчезает из крови и не определяется в ней при помощи ПЦР.
Вирус варицелла зостер является возбудителем ветрянки и опоясывающего лишая.
Его ДНК появляется в крови только в острую фазу инфекции.
Ветрянка обычно диагностируется клиническим методом.
Потому что она имеет достаточно характерные симптомы.
В то время как при опоясывающем герпесе происхождение болезни не всегда очевидно.
Высыпания появляются не сразу.
А если появляются, то клиника может быть атипичной.
Для подтверждения диагноза может быть использована диагностика крови методом ПЦР.
Такая диагностика применяется нечасто.
Но иногда в ней возникает необходимость в спорных клинических ситуациях.
Если вам нужно сдать анализ крови методом ПЦР, приходите в нашу клинику.
Здесь работают опытные врачи-венерологи.
Мы специализируемся в первую очередь на диагностике и лечении заболеваний с половым путем передачи.
У нас можно сдать кровь на:
При необходимости мы также можем обследовать вас на туберкулез, стафилококк и многие другие инфекции.
К нам стоит обращаться в таких ситуациях:
Мы также обследуем пациентов с уже установленным диагнозом.
Это необходимо для контроля лечения.
Наши преимущества:
После диагностики в нашей клинике можно пройти лечение, если в нём возникнет необходимость.
Для сдачи анализов крови методом ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.
intimnyjotvet.ru
ПЦР – часто применяемый в венерологии и инфектологии метод выявления различных патологий.
Биоматериалом для исследований может служить любая биологическая жидкость. Многие инфекции могут быть выявлены в крови, если их ДНК попадает в системный кровоток. С помощью анализа крови на РНК или ДНК микроорганизмов можно выявить множество различных инфекций.
Таким способом диагностируют в основном:
Реже ПЦР делают на грибки или паразиты. В большинстве случаев в крови определяются вирусы. Потому что другие группы микроорганизмов чаще создают локальные очаги воспаления. Но иногда происходит генерализация процесса.
Бактерии могут проникать в кровь, разноситься по организму. В этом случае проводится анализ крови методом ПЦР с целью их выявления.
Диагностика крови методом ПЦР бывает количественной и качественной. Иногда также проводятся полуколичественные тесты. При стандартном исследовании подтверждается или опровергается сам факт присутствия патогена в организме. Количественный метод используют для оценки уровня вирусной или бактериальной нагрузки. Полуколичественный способ используют для инфекций, которые иногда опасны, но в большинстве случаев не вызывают воспаления. Например, есть определенная концентрация, за границей которой есть риск патологии.
Тогда результатов может быть три:
При этом сами цифры, сколько именно копий ДНК содержит кровь в 1 мл, не указывают. Молекулярная диагностика методом ПЦР и дает возможность определить инфекции даже при небольшой концентрации возбудителей. Потому что данный диагностический тест обладает высокой чувствительностью.
У него также высокая специфичность. Ложноположительные результаты встречаются редко.
Этот анализ делают редко.
В основном ДНК вируса выявляют в биоматериале, полученном из поверхности высыпаний. Но анализ крови тоже делают. В ней могут быть обнаружены специфические участки ДНК.
Есть исследования с типированием или без него.
Часто анализ проводят сразу на 1 и 2 тип герпеса. При этом выявляется характерный для обоих типов фрагмент ДНК. То есть, он присутствует и у одного вируса, и у другого. Поэтому при положительном результате нельзя понять, каким типом заражен человек.
Часто это не имеет значения для определения терапевтической тактики. Потому что разные типы герпеса подавляются одними и теми же препаратами. Но есть значение для оценки прогноза заболевания.
Герпес 2 типа чаще рецидивирует. Соответственно, таким пациентам чаще назначается супрессивная терапия, направленная на снижение частоты обострений инфекции. Если возникает необходимость определения типа вируса герпеса, проводится ПЦР с типированием. В этом случае мишенью для выявления служат участки ДНК, характерные для одного либо другого вируса.
В результатах выдается не только «выявлено» или «не выявлено». Указывается и тип вируса простого герпеса.
Варицелла зостер – это возбудитель ветрянки и опоясывающего лишая.
Данный вирус входит в семейство герпеса. При анализе крови с помощью ПЦР можно обнаружить его ДНК.
Проводится диагностика:
Хотя герпес зостер может долгое время пребывать в организме в случае перенесенной ветрянки, инфекция протекает в латентной форме.
Вирус «прячется» в нервных ганглиях.
Потому его ДНК в крови не определяется.
ПЦР даст позитивный результат, только если есть симптомы инфекции. Поэтому, если симптомы появились, а ДНК варицеллы зостер в крови нет, это означает, что болезнь вызвана другим возбудителем.
Кровь на туберкулез сдают из локтевой вены. Это требуется для обнаружения ДНК микобактерий в системном кровотоке. Исследование делают для того, чтобы дифференцировать ограниченные и генерализованные формы туберкулеза.
Показания, при которых врачи могут назначить этот анализ:
Кроме того, женщины сдают менструальную кровь для выявления туберкулезного поражения репродуктивных органов.
Показания:
Результат выдается «обнаружено» или «не обнаружено». Выявление микобактерий – показание к назначению лечения.
Стафилококки являются условно-патогенными микроорганизмами. Это часть нормальной микрофлоры человека.
Бактерии живут на коже, в носу и мочеполовых органах.
Но иногда стафилококки способны вызывать тяжелые патологии.
При подозрении на генерализацию инфекции назначают ПЦР крови на стафилококк. Небольшое количество этих бактерий может присутствовать в крови в норме. Поэтому положительный результат выдается при их присутствии более чем 10 в 4 степени копий ДНК в мл крови. Это говорит о высокой вероятности заболеваний, таких как сепсис, менингит, пневмония стафилококковой этиологии.
С током крови бактерии могут попадать в различные органы. Установление этиологического фактора воспалительных процессов помогает подобрать более эффективное лечение.
На глисты ПЦР крови не делают.
Для диагностики используют ИФА – определяют уровень иммуноглобулинов в крови. А также исследуют материал, который взят непосредственно из очага поражения.
Паразитами также считаются одноклеточные простейшие микроорганизмы. Это трихомонада и токсоплазма.
На трихомонаду ПЦР делают. Но исследуют на кровь, а мазок из урогенитального тракта, мочу или эякулят.
А вот на токсоплазму делают и анализ крови методом ПЦР. Этот патоген опасен для беременных. Поэтому часто анализы проводят как скрининг при подготовке к зачатию.
Основные показания к проведению ПЦР на токсоплазмы:
Специфичность теста ПЦР очень высокая – она достигает 98%. Паразиты выявляются в крови даже в малых количествах.
Часто выполняется анализ крови методом ПЦР на гепатиты, которые передаются половым и парентеральным путем.
Хотя основными методами диагностики остаются серологические исследования крови. Диагноз обычно подтверждается путем определения антигенов и антител.
Тем не менее, ПЦР дает возможность:
ПЦР крови позволяет обнаружить ДНК вируса даже в инкубационный период.
В период ранней и поздней реконвалесценции генетический материал возбудителя исчезает из крови. Поэтому метод может применяться для подтверждения излеченности. Анализы проводят не только качественные, но и количественные.
Они позволяют оценивать:
С помощью количественного теста можно установить, какой вирус является главным виновником поражения печени. Ведь у одного пациента их может быть сразу несколько.
Часто ПЦР используют для обследования контактных лиц. Потому что это самый ранний маркёр вирусного гепатита В. Метод также позволяет обнаружить репликацию вирусов при хроническом течении заболевания ещё до появления клинических симптомов.
Введение в клиническую практику ПЦР позволило:
Стабильно высокая вирусная нагрузка – основание для противовирусной терапии.
Исследование применяют для:
ПЦР – более достоверный тест, чем анализ на антитела, который дает до 20% ложноположительных результатов. Метод дает возможность идентифицировать разные типы вируса.
В свою очередь это позволяет оценить прогноз заболевания и подобрать терапевтическую тактику. Кроме того, может использоваться анализ крови ПЦР количественный. Его назначают для оценки уровня вирусной нагрузки.
Исходная вирусная нагрузка оценивается для определения показаний к началу терапии. Она влияет на выбор схемы лечения.
В последующем анализ делают для оценки результативности терапии. Расшифровка анализа крови ПЦР на гепатит С дает возможность установить оптимальные дозы препаратов и сроки лечения.
Основным исследованием для первичной диагностики ВИЧ-инфекции остается анализ крови на антитела.
ПЦР применяется в ограниченном количестве случаев. Это исследование необходимо для подтверждения диагноза при слабоположительном результате крови на антитела.
ПЦР также проводится для первичной диагностики ВИЧ у новорожденных. Потому что наличие у них антител ни о чем не говорит.
Ведь долгое время после рождения в крови детей циркулируют материнские антитела. Таким образом, серологические тесты не позволяют врачу узнать, вырабатывает организм малыша собственные иммуноглобулины или нет. В то же время ПЦР позволяет определить вирусную РНК.
Поэтому позитивный результат теста свидетельствует о том, что ребенок болен ВИЧ.
ПЦР сдают при наличии подозрения на острую инфекцию. То есть, когда человек только недавно заразился, и у него проявился гриппоподобный синдром. В этом случае серологические анализы крови могут ещё не дать положительные результаты. Ведь с момента заражения прошло слишком мало времени.
ПЦР дает положительные результаты гораздо раньше других тестов, даже в ранние периоды инфекции. Поэтому именно этот метод используется в острой фазе заболевания.
ПЦР применяется для оценки качества донорской крови. Тем не менее, для первичной диагностики ПЦР применяется не вместо серологических тестов, а в дополнение к ним.
Причин тому несколько:
1. ПЦР не выявляет ВИЧ 2 типа, который составляет около 0,5% случаев
2. Возможны мутации ВИЧ, и в этом случае искомый фрагмент РНК может быть не найден Проблему решает проведение ПЦР с двойной мишенью. В этом случае определяется не один, 2 фрагмента генетического кода.
3. Организм некоторых пациентов сдерживает развитие ВИЧ. Вирусная нагрузка у них ниже определяемой. То есть, ПЦР дает отрицательный результат. При этом антитела в крови присутствуют. Таких пациентов около 1% от общего числа инфицированных.
Количественное исследование применяется не для выявления, а для мониторинга инфекции. Это исследование определяет показания к лечению и оценивает его результаты.
Виремия обозначается в количестве копий в мкл. Нагрузка ниже 10 тысяч копий считается низкой.
Если она превышает 100 тысяч копий, то её называют высокой. Эти границы весьма условны. Потому что даже у одного пациента в разных образцах крови возможны колебания значений вирусной нагрузки. Показателем успешности лечения ВИЧ и её целью является неопределяемая вирусная нагрузка.
У каждого теста ПЦР есть граница чувствительности. Это количество копий генетического материала вируса, при котором они передают определяться в крови. Обычно это 50 копий в мкл.
Если уровень вирусной нагрузки ниже, она считается неопределяемой. Это благоприятный прогностический знак.
Он говорит о том, что:
1. Антиретровирусная терапия работает. К препаратам ещё не выработалась резистентность. Поэтому в замене препаратов и коррекции схемы лечения нет необходимости.
2. Уровень СД4 лимфоцитов не будет уменьшаться. То есть, иммунитет человека не страдает. Поэтому в ближайшее время ожидать оппортунистических инфекций нет оснований.
У некоторых пациентов наблюдаются всплески вирусной нагрузки. Это значит, что иногда анализ крови на ВИЧ методом ПЦР показывает положительный результат.
Но при этом вирусная нагрузка минимальная. Она обычно не превышает 200 копий в мкл. Это не говорит о том, что терапия стала неэффективной. Со временем вирусная нагрузка снова может снизиться до неопределяемого уровня.
Благодаря определению вирусной нагрузки анализ крови методом ПЦР позволяет:
Если вам нужно исследовать кровь методом ПЦР, обращайтесь в нашу клинику.
Мы предлагаем:
В нашей клинике работают опытные врачи.
Анализы ПЦР крови на гепатиты С и В, ВИЧ и другие патологии можно сдать по доступным ценам.
Если вам необходимо сдать анализы крови методом ПЦР, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.
www.venerologia.ru
ПЦР анализ, или полимеразная цепная реакция, — метод ДНК — диагностики, основанный на многократном увеличении молекул ДНК и РНК, характерных для того или иного патогенного микроорганизма. Для увеличения скорости копирования нуклеиновых кислот используются ДНК и РНК ферменты.
ДНК — диагностика — это один из наиболее современных, высокотехнологичных методов исследования в лабораторной диагностике.
Данный метод исследования обладает многими преимуществами:
Одним из самых распространенных видов исследования является анализ крови методом полимеразной цепной реакции, ПЦР;
ПЦР — диагностика инфекций, передающихся половым путем, где одновременно выявляются:
ПЦР — диагностика бактериальных инфекций:
ПЦР — диагностика вирусных инфекций, ( вирусных гепатитов, герпеса и других ).
ПЦР — диагностика острых кишечных и респираторных инфекций, коронавируса.
Для данного анализа можно исследовать ряд других жидкостей организма: например, сок простаты, плевральную жидкость, спинномозговую, околоплодную, суставную, слюну и др..
Услышав жалобы на понос, рвоту, боли в животе, лечащий врач может направить клиента на сдачу ПЦР анализа кала.
ПЦР диагностика позволяет выявить в организме наличие следующих инфекций:
Степень достоверности результата зачастую зависит от подготовки пациента.
Туберкулез также можно выявить по результатам анализа крови методом ПЦР.
Для максимально точного результата исследования клиент должен подготовиться процедуре отбора биологического материала. Среди рекомендаций по подготовке к сдаче крови выделяют:
Для продуктивной сдачи мочи необходимо:
Подготовка к отбору мазка включает в себя:
analyzekrovi.ru
В молекулярной биологии, ПЦР в реальном времени (или количественная ПЦР, англ. Real-time PCR, qPCR, qRT-PCR) — лабораторный метод, основанный на методе полимеразной цепной реакции, используется для одновременной амплификации и измерения количества данной молекулы ДНК. Метод ПЦР в реальном времени включает в себя одновременно детекцию и количественное определение (измерение непосредственно количества копий, либо измерение копий относительно внесённой ДНК или дополнительных калибровочных генов) специфической последовательности ДНК в образце[1].
Метод использует общие принципы ПЦР. Основное отличие состоит в том, что измеряется количество амплифицированной ДНК в реальном времени после каждого цикла амплификации. Для количественного определения используют два метода — флюоресцентные красители, интеркалирующие в двуцепочечные молекулы ДНК, и модифицированные олигонуклеотиды (ДНК-зонды), которые флюоресцируют после гибридизации с комплементарными участками ДНК.
Часто ПЦР в реальном времени комбинируют с ОТ-ПЦР (обратная транскрипция) для измерения малых количеств мРНК, что позволяет исследователю получать количественную информацию о содержании данной мРНК в клетке и, соответственно, позволяет судить об уровне экспрессии данного гена в отдельной клетке или ткани[2].
Процедура очень похожа на процедуру классической ПЦР, то есть присутствуют все стадии реакции — плавление или денатурация двухцепочечных ДНК при температуре 95˚C, отжиг праймеров (температура отжига зависит от используемых праймеров) и элонгация при температуре 72˚С, если используется Taq-полимераза. Принцип ПЦР в реальном времени заключается в детекции ПЦР-продукта по мере его накопления. Сегодня это возможно сделать благодаря высокоспецифичным флуоресцентным зондам. Существует два основных подхода генерации света у таких зондов — во время элонгации и отжига, но, в обоих случаях флуоресценция усиливается с каждым новым циклом. Таким образом, сила сигнала говорит о первоначальном количестве интересующей молекулы[3].
На начальных этапах флуоресценция слабая, так как продукта ещё не очень много, поэтому её трудно отличить от фона. По мере накопления продукта, сигнал растёт сначала экспоненциально, а затем выходит на плато. Выход на плато объясняется нехваткой того или иного компонента реакции — могут закончиться праймеры, нуклеотидилтрифосфаты, метка. Если продукта реакции накопилось слишком много, то лимитирующим фактором может стать фермент, и тогда зависимость количества продукта от цикла станет линейной. Стоит отметить, что в стандартной реакции ПЦР в реальном времени все образцы выйдут на плато и достигнут примерно одного уровня сигнала. Таким образом, конечная точка ничего не скажет о начальном количестве исследуемого образца. С другой стороны, в экспоненциальной фазе можно проследить отличия в скорости роста продукта. Различия в начальном количестве молекул влияют на количество циклов, необходимых для поднятия уровня флуоресценции выше уровня шума[4].
Количество циклов, необходимое для того, чтобы флуоресценция достигла порогового уровня (над шумом) называется СТ-величиной. Пороговый уровень — не строго определённая величина, может подбираться для каждого случая отдельно.
Однако СТ-величина может зависеть от многих случайных факторов, например чувствительности детектора, качество фильтра и так далее. Поэтому точно начальное количество интересующего продукта померить нельзя. Для решения этой проблемы существуют методы нормировки. Измеряют отношение количеств двух молекул в пробе. Нормируют обычно на продукты генов домашнего хозяйства — таких генов, количество которых в клетке всегда примерно одинаковое (Пример — ген infA, кодирующий фактор инициации трансляции у бактерий). Соотношение определяют по следующей формуле: [N0 ]A/[N0 ]B = (1+E)(CTB-CTA)
Где [N0 ]A и [N0 ]B — начальные количества двух образцов, CTB и CTА — соответствующие CT-величины, а E — эффективность ПЦР, которая часто приравнивается к 1 или 0.9[4].
В данном случае меткой служит химическое соединение, способное интеркалировать в двойную спираль ДНК. Такой зонд меняет свою конформацию при взаимодействии с продуктами ПЦР и становится флуорофором. Детекцию можно проводить в конце каждого цикла, перед стадией денатурации. Примером такой краски может служить широко используемый SYBR Green.
Существует другой способ использования зондов, к которым с 5’ и 3’ концов пришиты флуорофор и его гаситель. Если последовательность зонда не очень длинная, то даже в связанном с ДНК состоянии два химических реагента будут взаимодействовать друг с другом, и не будет испускаться флуоресценция. Во время элонгации ДНК полимераза, обладающая 5’-3’-экзонуклеазной активностью, по одному нуклеотиду диссоциирует зонд от ДНК-мишени. В результате этого процесса и флуорофор и его гаситель попадут в раствор, где вероятность нахождения этих веществ рядом будет небольшой, и флуоресценция восстановится[3].
Флуорогенная шпилька — небольшая одноцепочечная молекула ДНК, которая в свободном состоянии способна образовывать [пространственную структуру| вторичная структура ДНК] — шпильку. На один конец цепочки пришивают флуорофор, а на второй — вещество, его гасящее. Последовательность зонда комплементарна ДНК-мишени, которую нужно детектировать. В таком случае те молекулы зонда, которые плавают в растворе, не будут давать флуоресцентный сигнал, а связавшиеся с молекулами ДНК будут претерпевать конформационные изменения, в результате которых произойдет пространственное разнесение флуроофора и его гасителя и восстановление флуоресценции. Детекцию целесообразно проводить после денатурации[3].
Другой вариант мечения вновь-образующегося ПЦР-продукта основывается на методе FRET. Основа этого метода — наличие двух зондов, которые связываются с ДНК-мишенью на небольшом расстоянии друг от друга. На 5’-конец одного зонда и 3’-конец второго пришиты флуорофор-донор и флуорофор-акцептор соответственно. При их близком расположении происходит следующее: флуорофор-донор поглощает свет определённой длины волны и испускает свечение в более длинноволновом спектре. Эту волну, в свою очередь, поглощает флуорофор-акцептор и испускает свет, который можно детектировать[3].
Можно также использовать несколько зондов, у которых флуорофоры имеют разные спектры испускания. В таком случае появляется возможность в одной пробирке детектировать сигнал от разных молекул ДНК. Метод носит название множественный ПЦР (multiplex PCR).
Метод был изобретён для детекции количества ДНК в пробе, однако, последнее время все чаще используется немного видоизменённый количественный ПЦР для детекции РНК. Метод носит название ПЦР в реальном времени с реакцией обратной транскрипции (ОТ-кПЦР , RT-qPCR). Этот метод широко используется для характеризации или сравнения уровней мРНК в разных популяциях[5].
Прежде, чем проводить стандартный ПЦР в реальном времени, нужно провести реакцию обратной транскрипции, для синтеза кДНК. Реакция обратной транскрипции проводится с помощью фермента — обратной-транскриптазы (РНК-зависимой ДНК полимеразы, ревертазы). Реакцию можно проводить без добавления праймера, однако наибольшая эффективность достигается, когда праймер добавлен. Существует три основных типа праймеров:
Реакция обратной транскрипции — ключевой этап в данном подходе, так как количество кДНК должно соответствовать количеству изучаемой мРНК. РНК-молекула менее стабильна, чем ДНК, поэтому при выделении РНК и проведении ОТ-кПЦР нужно тщательно следить за чистотой процедур и не допускать попадания большого количества РНКаз.
Полуколичественная ПЦР (semi-quantitative PCR) — немного модифицированный метод количественного ПЦР с реакцией обратной транскрипции. Он часто используется для сравнения экспрессии нескольких генов. В данном случае измеряют количество накопленного продукта только в одной точке — после остановки реакции. ПЦР реакция останавливается, когда предполагается, что накопление продукта находится в экспоненциальной фазе роста и ПЦР-продукт можно детектировать. Далее, после электрофореза или саузерн-блота, можно измерить разницу в экспрессии нескольких образцов[5]. Использование данного метода критикуется в профессиональной среде, т.к. данный метод подразумевает оценку "на глазок".
ПЦР в реальном времени широко используется для решения многих исследовательских задач в лабораториях. Кроме того, этот метод нашёл применение в медицине (для диагностики заболеваний) и в сфере биотехнологий (для определения содержания микроорганизмов в продуктах питания и растительных материалах; для детекции ГМО). Также кПЦР используется для генотипирования вирусов и других патогенов человека и определения их количественного содержания.
Количественная ПЦР применяется для быстрого выявления генов или фрагментов ДНК, являющихся маркерами инфекционных заболеваний, генетических отклонений и т. д. Внедрение этого метода в клинические лаборатории значительно улучшило качество диагностики инфекционных заболеваний[6]. Кроме того, кПЦР используется в качестве инструмента для детектирования вновь возникающих заболеваний. Например, новых штаммов гриппа[7].
Использование кПЦР также позволяет проводить количественные измерения и генотипирование (характеристика штаммов) вирусов, например, вируса гепатита B[8]. Степень инфекции, которая оценивается, как число копий вирусного генома на единицу ткани пациента, имеет большое значение во многих случаях. Например, вероятность реактивации вируса простого герпеса типа 1 зависит от количества инфицированных ганглиев[9]. В зависимости от того, интегрировал ли вирус в геном пациента (как, например, в случае вируса папилломы человека) или нет, количественный анализ осуществляется с применением обратной транскрипции или без неё.
Количественная ПЦР также широко используется для детекции опухолевых клеток в материале из со́лидных опухолей[10][11] и даже при некоторых формах лейкемии[12][13].
Рак молочной железы все ещё является наиболее частой причиной смерти среди раковых больных. Причём, часто смерть вызвана не только самой опухолью, но и возникшими метастазами. Сами метастазы возникают в результате того, что особенные клетки, способные к пролиферации, отделяются от опухоли, выходят в кровяное русло и вторично поселяются в какой-то части организма. Эти клетки называются циркулирующими стволовыми клетками (ЦСТ). Присутствие таких клеток в крови пациентов, больных раком молочной железы, как правило, связано с плохим прогнозом исхода терапии и выживаемости в целом, поэтому является очень важным диагностическим параметром. Но из-за очень низкого количества, выявление ЦСТ — является довольно трудной задачей. И кПЦР, как высокочувствительный метод, может быть использован для решения этой проблемы. Дело в том, что, как и все раковые клетки, ЦСТ имеют эпителиальной происхождение и, следовательно экспрессируют определённый набор генов, отличающийся от окружающих их клеток крови, имеющих мезенхимальное происхождение. Для применения этого метода необходимо определить набор генов-маркеров ЦСТ и оценить их уровень экспрессии[14].
ПЦР в реальном времени также применяется для микробиологических работ в сфере безопасности продуктов питания, для оценки качества вод (питьевых и сточных) и в сфере здравоохранения[15]. Кроме того, данный метод используется для идентификации кишечной микрофлоры[16].
В ходе проведения исследований, кПЦР в основном используется для проведения количественных измерений транскрипции генов. Данный метод широко применяется для оценки изменений во времени экспрессии определённого гена, например, в ответ на введение лекарственного средства или изменения условий окружающей среды . Он также используется для определения зиготности трансгенных животных, используемых в исследовании. Для решения некоторых задач данный метод специально модифицируется
мяРНК отличаются по свойствам от мРНК тем, что имеют очень малую длину (около 22 нуклеотидов), не имеют консервативной последовательности на концах, при этом мяРНК одной популяции могут отличаться на один или несколько нуклеотидов. Для решения этих проблем используют подходы, основанные на добавлении небольшого участка ДНК (линкера) к кДНК в реакции обратной транскрипции. Затем проводится ПЦР в реальном времени стандартными способами с использованием праймеров, комплементарных линкеру[17].
Для измерения количества белка в клетке используют следующий подход:
Агропромышленность стремится производить семена и рассаду, не содержащую патогенных микроорганизмов, с целью предотвращения экономических потерь и увеличения срока хранения. Поэтому были разработаны системы, позволяющие обнаружить небольшие количества ДНК фитофторы (Phytophthora ramorum), оомицетов и некоторых других патогенов, которые приводят к гибели дубов и других видов растений, в смеси с ДНК растения-хозяина. Возможность различить ДНК возбудителя и растения-хозяина основана на амплификации последовательностей ITS (internal transcribed spacer), внутренних транскрибируемых участков, расположенных в кодирующей области гена рибосомной РНК, которые характерны для каждого таксона[19].
кПЦР (с использованием обратной транскрипции) может быть использована для детекции ГМО (генетически модифицированных организмов), так как является более чувствительным по сравнению со многими другими методами. При этом специфические праймеры используются для амплификации промотора, терминатора или даже промежуточных последовательностей, используемых в процессе создания вектора. Так как процесс создания трансгенного растения обычно приводит к вставке более, чем одной копии трансгена, его количество также обычно оценивается с помощью кПЦР. При этом в качестве контроля используют растение, содержащее данный ген в единственном экземпляре[20][21].
ru.wikipedia.org
Еще совсем недавно, каких-нибудь десять лет назад при диагностике заболеваний, передающихся половым путем, в ходу были простые и бюджетные методики лабораторных исследований.
Они якобы давали исчерпывающее представление о возбудителях половых инфекций и их наличии в организме человека.
Трихомонаду и гонококк было принято искать в мазках.
Окрашены они были самыми разными красителями под самым простым световым микроскопом.
Разве что лаборант мог плеснуть иммерсионного масла для лучшей подсветки.
Никого особо не смущало, что красители меняют форму и подвижность тех же трихомонад.
После чего отличить их от патологически измененной клетки эндотелия весьма проблематично.
Хламидий, вернее антитела к ним, титровали из крови.
Уреаплазмы и микоплазмы выращивали колониями на твердых и жидких средах, по неделе ожидая, пока колонии заколосятся.
В целом их считали условными патогенами.
И предпочитали не замечать, пока не расцветала клиника урогенитальной инфекции или не вставал вопрос о бесплодии.
Метод ПЦР диагностики стал революцией в лабораторном деле.
Раз и навсегда она решила проблему сжатых сроков диагностического поиска.
Максимально приблизила ответ на вопрос “Что вызвало воспаление?” к первому визиту пациента к специалисту.
Сегодня никого не надо заставлять дожидаться ответов анализов по неделе.
И с замиранием сердца готовиться к худшему, временно вместо антибактериального или противовирусного лечения принимая успокоительные.
Содержание статьи
Если доступно отвечать на вопрос “ПЦР-анализ, что это такое?”, — то придется вспомнить следующее.
Всякое живое существо несет в себе наследственную информацию, которую получает от родителей и передает детям.
Это либо РНК (рибоксинуклеиновая кислота), либо ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота).
Либо и то, и другое, в одном существе в разных вариантах.
РНК – это одна цепочка нуклеиновых кислот, ДНК – две.
Собственно, вот эти цепочки или их обломки и ищут, когда ведется ПЦР-диагностика инфекций.
По сути, этот параметр показывает, сколько микробов или вирусов, или их фрагментов должно попасть в образец для исследования, чтобы анализ мог отреагировать на их присутствие.
Когда проводят ПЦР-диагностику, для успешности достаточно даже обломков наследственного материала.
Это позволяет зафиксировать присутствие возбудителя в крови даже в прошлом (до полугода от того момента, как лекарства успешно справились с заразой).
Это делает ПЦР уникальным ретроспективным методом.
Для оценки ранее существовавших, но уже утраченных поводов для воспалений, с последствиями которых приходится иметь дело клиницистам (например, бесплодием).
То есть имеется бесплодная пара и все еще не ясно, в чем заключается причина проблемы.
На данный момент оба клинически здоровы, за исключением, скажем, изменений в спермограмме у мужчины.
С помощью ПЦР можно установить, какие именно инфекции присутствовали в организме мужчины за последние полгода и предположить, что именно они стали камнем преткновения.
Какие инфекции можно проверить ПЦР-анализом?
Да практически любые.
Острые, хронические, рецидивирующие, даже ранее существовавшие.
Бактериальные, грибковые, вирусные, протозойные.
Любой инфекционный агент, имеющий геном, можно засечь методом амплификации нуклеиновых кислот.
В половых и мочевыводящих путях, ухе, горле, носу, дыхательной системе, ЖКТ.
С любого участка тела, с которого удастся получить образец клеток.
Это дает методике очень широкий спектр применения.
Что касается забора образцов для исследования, пожеланием врачей-лаборантов остается предоставление тех тканей, в которых подозревается наличие возбудителя.
Хотя кровь и продолжает считаться универсальным материалом для анализа, не стоит пренебрегать исследованиями того, что получено непосредственно с “места событий”.
Исследование может проводиться в день первого обращения к врачу, если будет произведен забор образцов.
Ответы выдаются в течение первых двух суток.
При необходимости в течение нескольких часов.
Таким образом, метод — экспресс-диагностика, сильно сокращающая сроки лечения и ускоряющая его начало.
Стандартно выполняются соскобы и мазки у женщин на гинекологическом кресле.
У мужчин при урологическом осмотре.
Чаще всего это все же соскоб эндотелиальных клеток мочевыводящих путей.
При отсутствии воспалительных изменений болей при манипуляции нет.
Воспаленные слизистые более подвержены микротравмам и могут давать незначительные контактные кровотечения.
С ними ничего не нужно делать, проходят самостоятельно за несколько часов или суток.
Для женщин сначала выполняется забор проб из уретры, затем из влагалища и наконец из шеечного канала.
Они вводятся на пару сантиметров и вынимаются с легким нажимом на стенки уретры.
Полученный образец также переносится в пробирку.
У мужчин соскоб предполагает использование урологического зонда.
Он вводится в мочеиспускательный канал на глубину 3-4 сантиметра и вынимается с легким нажатием на стенки уретры.
Образцы других биологических жидкостей и тканей берутся в лаборатории или на приеме у профильного специалиста.
Очень часто у пациентов клиник и лабораторий возникает масса вопросов по поводу того, как готовиться, ПЦР-анализ требует ли специальных мероприятий от пациента.
Чтобы исследование стало максимально достоверным, желательно соблюдение некоторых условий.
Подготовка к ПЦР крови и мазка включает следующие пункты.
Обычно это гинеколог, уролог и венеролог.
То есть специалисты, которым требуется чаще других сталкиваться со скрытыми вариантами или носительством инфекций, лечение которых нужно начинать как можно скорее.
Не менее редко в ПЦР нуждаются инфекционисты.
Особенно в случаях внутриутробных инфекций или других инфекционных процессах невыясненной этиологии.
Сколько по времени делается ПЦР-анализ, зависит от возможностей лаборатории и срочности, с которой нужно получить ответ.
Обычно это не более трех рабочих дней.
Стандартными ситуациями, требующими применения данного обследования, становятся:
Проявляемая анализом высокая чувствительность к половым инфекциям позволяет работать методикой при разных видах возбудителей.
Лучше всего выявляются уреаплазмы, микоплазмы, хламидии, а также вирусы папилломы, герпеса, гепатитов, ВИЧ, цитомегаловирус.
Есть возможность применить диагностическую тактику сразу после заражения.
В ходе исследования амплификатор периодически нагревает и охлаждает образцы с добавленными ферментами-ускорителями в пробирках.
На первом этапе расщепляют двойную цепочку ДНК искомого возбудителя.
Затем на ее короткий участок садятся два праймера (затравки) из стандартного набора, уникальные для данного возбудителя.
Для образования гибрида между матричной ДНК и праймером требуется повысить температуру.
После этого происходит удвоение участков ДНК инфекционного агента и их выделение электрофорезом и выявление.
В дальнейшем участок можно изучать и типировать.
Методика незаменима в ситуациях, когда возбудители не поддаются культуральному выращиванию, ускользают от серодиагностики.
Цена мазка и крови может несколько отличаться в разных клиниках и лабораториях.
Целесообразно, чтобы забор материала проводился в клинике, оснащенной лабораторными мощностями.
Это позволяет ограничить загрязнение образцов посторонними микробными примесями.
Анализ совмещает в себе достоинства качественного и количественного теста.
Качественные характеристики отражают в бланке отметками “не обнаружено”.
То есть ответ отрицательный
Или “обнаружено” при положительной пробе.
Ложноотрицательный и ложноположительный анализ тоже возможны.
Сразу после лечения и в течение шести-девяти месяцев после его окончания диагностика может свидетельствовать о присутствии генетической информации возбудителя в крови или других средах и тканях организма.
По истечении указанного срока анализ становится отрицательным.
Существуют различные модификации полимеразной цепной реакции, направленные на улучшение результативности.
Выбор методик обусловлен в лабораториях и клиниках обычно не только диагностическими потребностями, но и существующими возможностями.
То есть наличием или отсутствием расходных материалов, используемых в различных модификациях исследований.
Отправляясь на обследование, проходя его или получая ответ анализа на руки, не нужно думать, что результат автоматически равняется диагнозу.
Целый ряд обстоятельств может сопровождать присутствие в организме инфекционного агента.
ПЦР определяет не только живой, но и погибший после медикаментозного лечения биологический материал.
Правильно расшифровать и истолковать данные анализов может только грамотный врач-клиницист.
Нельзя пренебрегать полноценной консультацией, лишь обратившись в лабораторию и выполнив исследование.
Каждое заболевание требует полноценного подхода: поиска его причины, разработки тактики лечения и достижения результатов.
Максимально коротким этот путь становится только при содействии врача.
Он в состоянии не только подобрать лечение, но и провести его коррекцию в случае необходимости, а также проконтролировать результаты и эффективность терапии.
Большой процент половых инфекций существует в скрытых, хронических формах или объединяется с другими представителями соей группы.
Хламидиям могут сопутствовать трихомонады и гонококки, гепатитам — ВИЧ и туберкулез, герпесу — папилломавирус.
Даже скудная симптоматика хронических инфекционных процессов или ее отсутствие – не гарантия латентного периода инфицирования или отсутствия позднейших осложнений.
Попытки отмахнуться от проблемы или сэкономить на ее решении часто оборачиваются не только лишними затратами времени и денежных средств.
Но и потерями репродуктивных возможностей и сексуального здоровья.
Рационально выбирая врача, а не только клинику и лабораторию, вы решаете задачу сохранения здоровья максимально эффективно.
При необходимости сдать ПЦР анализ обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.
onvenerolog.ru
Название исследования | Клинический материал | Результат | Срок испол. | Цена |
Хламидии | ||||
ДНК Chlamydia trachomatis | соскоб урогенит. тракта, секрет простаты, сперма, моча, мазок с коньюнктивы, мазок из ротоглотки, синовиальная жидкость | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
ДНК Chlamydia trachomatis | соскоб урогенит. тракта, моча, мазок из влагалища | кол. | 3 р.д. | 560,00р. |
Микоплазмы | ||||
ДНК Mycoplasma hominis | соскоб из урогенит. тракта секрет простаты, сперма, моча | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
ДНК Mycoplasma hominis | соскоб из урогенитального тракта | кол. | 3 р.д. | 360,00р. |
ДНК Mycoplasma genitalium | соскоб урогенит. тракта, секрет простаты, сперма, моча | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
ДНК Mycoplasma genitalium | соскоб урогенит. тракта, моча, мазок из влагалища | кол. | 3 р.д. | 560,00р. |
Уреаплазмы | ||||
ДНК U.urealyticum / U. parvum | соскоб из урогенит. тракта, моча, секр. простаты, сперма | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
ДНК U.urealyticum / U. parvum | соскоб урогенит. тракта | кол. | 3 р.д. | 420,00р. |
Гарднереллы | ||||
ДНК Gardnerella vaginalis | соскоб из урогенит. тракта | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
Трепонемы | ||||
ДНК Treponema pallidum | соскоб из урогенит. тракта, секрет простаты | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
Нейссерии | ||||
ДНК Neisseria gonorrhoeae | соскоб из урогенит. тракта, моча, секрет простаты, сперма | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
ДНК Neisseria gonorrhoeae | соскоб из урогенитального тракта, моча, мазок из влагалища | кол. | 3 р.д. | 630,00р. |
Микобактерии | ||||
ДНК Mycobacterium tuberculosis complex | секрет простаты, сперма, моча, мокрота, СМЖ, БАЛ, ПЖ, синовиальная жидкость | кач. | 2 р.д. | 290,00р. |
Стрептококки группы А | ||||
ДНК Streptococcus pyogenes (Стрептококки группы А) | мазок из ротоглотки | кач. | 2 р.д. | 290,00р. |
Стрептококки группы В | ||||
ДНК Streptococcus agalactia (SGB) | соскоб из урогенитального тракта, моча | кол. | 2-3 р.д. | 260,00р. |
ДНК Streptococcus agalactia (SGB) | кровь с ЭДТА | кол. | 3 р.д. | 630,00р. |
ДНК Streptococcus agalactia (SGB) | мазок из ротоглотки, мокрота, БАЛ, СМЖ | кол. | 3 р.д. | 630,00р. |
Листерии | ||||
ДНК Listeria monocytogenes | СМЖ, АЖ | кач. | 2 р.д. | 420,00р. |
ДНК Listeria monocytogenes | кровь с ЭДТА | кач. | 4 р.д. | 420,00р. |
ДНК Listeria monocytogenes | кал | кач. | 3 р.д. | 440,00р. |
ДНК Bordetella pertussis/parapertussis/bronchiseptica | мазок из носа/зева, аспират, мокрота, БАЛ | кач. | 3 р.д. | 1260,00р. |
ДНК Campylobacter species | кал | кач. | 4 р.д. | 440,00р. |
ДНК Salmonella species | кал | кач. | 4 р.д. | 440,00р. |
ДНК Shigella + E. coli (энтероинвазивные штаммы) | кал | кач. | 4 р.д. | 760,00р. |
ДНК Salmonella/Shigella / Campylobacter / Adenovirus | кал | кач. | 3 р.д. | 830,00р. |
РНК Rotavirus / Astrovirus / Norovirus / Enterovirus | кал | кач. | 3 р.д. | 950,00р. |
Диарогенные эшерихиозы | кал | кач. | 3 р.д. | 730,00р. |
Кандида | ||||
ДНК Candida albicans | соскоб из урогенит. тракта | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
Токсоплазма | ||||
ДНК Toxoplasma gondii | СМЖ, АЖ | кач. | 2 р.д. | 390,00р. |
ДНК Toxoplasma gondii | кровь с ЭДТА | кач. | 4 р.д. | 390,00р. |
Трихомонады | ||||
ДНК Trichomonas vaginalis | соскоб из урогенит. тракта, секрет простаты, моча | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
ДНК Trichomonas vaginalis | соскоб из урогенит. тракта, моча, мазок из влагалища | кол. | 3 р.д. | 390,00р. |
Пневмоцисты | ||||
ДНК Pneumocystis jirovecii (carinni) | мазок из ротоглотки, мокрота, БАЛ | кач. | 3 р.д. | 320,00р. |
Гепатит A | ||||
РНК HAV | кровь с ЭДТА | кач. | 4 р.д. | 440,00р. |
Гепатит В | ||||
ДНК HBV | биоптат | кач. | 7 р.д. | 440,00р. |
ДНК HBV | кровь с ЭДТА | кач. | 4 р.д. | 440,00р. |
ДНК HBV | кровь с ЭДТА | кол. | 7 р.д. | 1420,00р. |
ДНК HBV | кровь с ЭДТА | ген. | 10 р.д | 1160,00р. |
ДНК вируса гепатита В (ДНК HBV), ультрачувствительный метод | кровь с ЭДТА | кач. | 10 р.д | 2100,00р. |
Гепатит С | ||||
РНК HCV | биоптат | кач. | 7 р.д. | 440,00р. |
РНК HCV | кровь с ЭДТА | кач. | 4 р.д. | 440,00р. |
РНК HCV | кровь с ЭДТА | кол. | 7 р.д. | 1950,00р. |
РНК HCV (типы 1,2,3) | кровь с ЭДТА | ген. | 4 р.д | 800,00р. |
РНК HCV (типы 1а, 1b, 2, 3а, 4, 5, 6) | кровь с ЭДТА | ген. | 10 р.д | 1800,00р. |
РНК вируса гепатита С (РНК HCV), ультрачувствительный метод | кровь с ЭДТА | кач. | 10 р.д | 1950,00р. |
Гепатит D | ||||
РНК HDV | биоптат | кач. | 7 р.д. | 440,00р. |
РНК HDV | кровь с ЭДТА | кач. | 3 р.д. | 440,00р. |
Гепатит E | ||||
РНК HEV | кровь с ЭДТА | кач. | 3 р.д. | 780,00р. |
Гепатит G | ||||
РНК HGV | кровь с ЭДТА | кач. | 3 р.д. | 440,00р. |
Цитомегаловирус | ||||
ДНК Cytomegalovirus | соскоб из урогенит. тракта, моча, мазок с коньюнктивы, мазок из ротоглотки, АЖ , СМЖ | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
ДНК Cytomegalovirus | кровь с ЭДТА | кол | 4 р.д. | 410,00р. |
ДНК Cytomegalovirus | кровь с ЭДТА (плазма) | кол | 10 р.д. | 830,00р. |
Вирус простого герпеса | ||||
ДНК Human herpes virus 1, 2 типов | соскоб урогенит. тракта, мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ | кач. | 2 р.д. | 190,00р. |
ДНК Human herpes virus 1, 2 типов | кровь с ЭДТА | кач. | 4 р.д. | 360,00р. |
Вирус герпеса VI типа | ||||
ДНК Human herpes virus 6 типа | мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ | кач. | 2 р.д. | 320,00р. |
ДНК Human herpes virus 6 типа | кровь с ЭДТА | кол | 4 р.д. | 340,00р. |
Вирус Эпштейна-Барр | ||||
ДНК Epstein-Barr virus | мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ | кач. | 2 р.д. | 370,00р. |
ДНК Epstein-Barr virus | кровь с ЭДТА | кол | 4 р.д. | 410,00р. |
Вирус Варицелла - Зостер | ||||
ДНК Varicella-Zoster virus | мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ | кач. | 2 р.д. | 360,00р. |
ДНК Varicella-Zoster virus | кровь с ЭДТА | кач. | 4 р.д. | 360,00р. |
Папилломавирус | ||||
ДНК ВПЧ 16 и 18 типов | Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) | кач. | 3 р.д. | 190,00р. |
ДНК ВПЧ 6 и 11 типов | Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) | кач. | 3 р.д. | 190,00р. |
Количество ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59,68 типы) | Соскоб из урогенитального тракта женщин (цервикальный канал, шейка матки) | кол. | 5 р.д. | 840,00р. |
Количество ДНК ВПЧ 16 и 18 типов | Соскоб из урогенитального тракта женщин (цервикальный канал, шейка матки) | кол. | 5 р.д. | 440,00р. |
ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59,68 типы) | Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) | кач. | 3 р.д. | 320,00р. |
ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59 типы) | Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) | ген. | 5 р.д. | 710,00р. |
ВПЧ-тест расширенный (с определением кол-ва и типа вируса) | Соскоб из цервикального канала | комп. | 3-7 р.д. | 1260,00р. |
ВПЧ-ПАП-тест (комплекс тестов ВЧП расширенный с определением кол-ва и типа вируса) | Соскоб из цервикального канала (стекло + пробирка) | комп. | 3-7 р.д. | 2840,00р. |
ВПЧ-ПАП-тест жидкостный (комплекс тестов ВЧП расширенный с определением кол-ва и типа вируса и ПАП-тест) | Соскоб из цервикального канала жидкостный | комп. | 3-7 р.д. | 3360,00р. |
ВПЧ-тест расширенный жидкостный (с определением кол-ва и типа вируса) | Соскоб из цервикального канала жидкостный | комп. | 3-7 р.д. | 1680,00р. |
ПАП-тест жидкостный | Соскоб из цервикального канала жидкостный | 7 р.д. | 2540,00р. | |
Энтеровирус | ||||
РНК Enterovirus | СМЖ, мазок из ротоглотки | кач. | 3 р.д. | 530,00р. |
РНК Enterovirus | кровь с ЭДТА | кач. | 4 р.д. | 420,00р. |
РНК Enterovirus | кал | кач. | 4 р.д. | 530,00р. |
Аденовирус | ||||
РНК Adenovirus | мазок из носа/зева, мазки с конъюнктивы, СМЖ | кач. | 3 р.д. | 530,00р. |
Вирусы гриппа А и В , парагриппа 1,2,3,4 типов | ||||
Вирус гриппа А и В (РНК Myxovirus influenza) | отделяемое носоглотки | кач. | 2 р.д. | 420,00р. |
Вирус парагриппа 1,2,3,4 типов (РНК Parainfluenza virus 1,2,3,4) | отделяемое носоглотки | кач. | 2 р.д. | 480,00р. |
РНК вирусов гриппа А и В, парагриппа 1,2,3,4 типов (РНК Myxovirus influenza, РНК Parainfluenza virus 1,2,3,4) | отделяемое носоглотки | кач. | 2 р.д. | 790,00р. |
"Вирус гриппа А, А/h2N1/СА/2009, В" (свиной грипп) | мазок из носа и зева | кач. | 2 р.д. | 1160,00р. |
Парвовирус В19 | ||||
ДНК Parvovirus B 19 | мазок из ротоглотки, слюна, АЖ | кач. | 3 р.д. | 770,00р. |
ДНК Parvovirus B 19 | кровь с ЭДТА | кол. | 3 р.д. | 420,00р. |
ВИЧ (Вирус иммунодефицита человека) | ||||
ДНК HIV | кровь с ЭДТА | кач. | 10 р.д. | 1580,00р. |
РНК HIV | кровь с ЭДТА | кол. | 10 р.д. | 4410,00р. |
РНК/ДНК ВИЧ 1 типа, ультрачувствительный метод | Очищенные сперматозоиды | 10 р.д. | 9450,00р. | |
Вирус краснухи | ||||
РНК вируса краснухи (Rubella virus) | Кровь с ЭДТА | кач. | 3 р.д. | 730,00р. |
РНК вируса краснухи (Rubella virus) | Мазок из ротоглотки, амниотическая жидкость (АЖ), спинномозговая жидкость (СМЖ, ликвор) | кач. | 3 р.д. | 800,00р. |
Респираторно-синцитиальный вирус | ||||
РНК респираторно-синцитиального вируса человека (hRSV) | Мазок из носа/зева, аспират, мокрота,БАЛ | кач. | 2 р.д. | 1260,00р. |
КОМПЛЕКСНАЯ ДИАГНОСТИКА ОРВИ | ||||
Диагностика ОРВИ РНК hRSv - Respiratory Syncytial virus (респираторно-синцитиальный вирус человека) РНК hMpv - Metapneumovirus (метапневмовирус человека) РНК hСv- Coronavirus (коронавирус человека) РНК hRv- Rhinovirus (риновирус человека) ДНК hAdv - Adenovirus B, C, E (аденовирус человека групп B, C и E) ДНК hBv - Bocavirus (бокавирус человека) РНК hPiv - Parainfluenza virus (вирус парагриппа человека 1, 2, 3 и 4 типов) |
Мазок из носа/зева, аспират, мокрота,БАЛ | кач. | 2 р.д. | 1680,00р. |
rammedic.ru
Результаты ПЦР и особенности их расшифровки интересуют многих людей, чьим диагнозом является подозрение на ЗППП.
Как отмечают доктора, метод обладает высокой результативностью и минимальным процентом ошибок. Поэтому зачастую используется как контрольный в диагностике инфекционных процессов.
В чем состоит суть ПЦР методики, хотят знать больные люди, и благодаря чему обеспечивается высокая вероятность получения верных результатов. Как расшифровываются полученные итоги, и есть ли связь между этим методом и другими способами диагностики?
Содержание статьи
ПЦР-методика – исследование, используемое довольно широко в современном мире. Диагностика позволяет поставить диагноз не только при инфекционных процессах, но и при генетических патологиях, некоторых онкологических недугах. Изначально ПЦР изобреталась не для применения в медицине.
В отрасль здравоохранения метод пришел из области молекулярной биологии, в которой активно использовался после своего открытия. Ученый, создавший ПЦР, получил нобелевскую премию.
Прежде чем разбираться, как расшифровывать результаты анализов ПЦР, необходимо понять, в чем основная суть методики.
На самом деле на словах все выглядит довольно просто. У пациента берется биологический материал. Затем он обрабатывается особым образом с помощью специальных химических реагентов.
Затем получившуюся смесь помещают в особую машину, которая проводит процесс амплификации. То есть многократного умножения определенных фрагментов ДНК или РНК, что удалось выявить с помощью добавления реагентов.
Когда процесс амплификации подойдет к концу, доктору остается только идентифицировать полученные результаты, чтобы поставить верный диагноз.
Главное – проявить внимательность на этапе идентификации. Но учитывая, что сегодня большую часть работы делает компьютер, все сильно упрощается.
ПЦР отличается высокой эффективностью. Ее широко применяют для того, чтобы определять наличие в организме скрытых инфекционных процессов, которые не дают положительных серологических реакций. Также скрытые инфекции обычно нельзя выявить с помощью посева или микроскопии. Поэтому зачастую ПЦР – единственный достоверный способ постановки диагноза в этом случае.
Часто удачность исследования зависит от того, как и какой материал брался для выполнения анализа. Однако в случае с полимеразной цепной реакцией расшифровка результатов ПЦР исследований мало зависит от биологического материала, который брался у пациента. Гораздо большее значение имеет подготовка к обследованию с помощью метода.
В качестве материала могут служить:
Как отмечают врачи, материалом для ПЦР может быть совершенно любая жидкая среда организма человека.
При выборе главное помнить о том, что предпочтение отдают той среде, где с большей долей вероятности будет присутствовать возбудитель. Например, при половых инфекциях целесообразнее брать мазок с половых органов или кровь, чем мазок из ротовой полости.
Решать вопрос о том, какие материалы используются для получения результатов ПЦР в том или ином случае, лучше всего с лечащим врачом на приеме. Доктор сделает оптимальный выбор, исходя из предполагаемого у пациента заболевания.
ПЦР – метод, который может похвастаться своей высокой специфичностью.
Предположим, доктор поставил себе цель обнаружить какой-то патогенный микроорганизм в теле пациента. И если тот на самом деле присутствует в теле, он будет обнаружен. При этом спутать его с каким-либо другим патогеном благодаря уникальному коду ДНК будет невозможно.
Если ПЦР положительный, значит, в организме с вероятностью почти в 100% находится возбудитель, поиск которого проводился врачом. Ведь методика рассчитана, в отличие от многих других диагностических методов, именно на поиск самих возбудителей, а не их следов.
Как отмечают доктора, при данном исследовании вероятность случайно принять один возбудитель за другой сводится к нулю. Зато существует вероятность получения положительных результатов после терапии.
Если в организме будут оставаться обломки нуклеиновых кислот. Однозначно положительной реакция чаще всего бывает, если пациент предъявляет жалобы на какие-то конкретные симптомы инфекционного процесса. Причем результат будет сохраняться даже в течение нескольких месяцев после того, как возбудитель будет полностью побежден и удален из организма.
Если ПЦР результат отрицательный, значительное число пациентов автоматически считают, что они здоровы. Это практически правильное решение.
Ведь если итоги оказались отрицательными, значит фрагменты патогенного микроорганизма не были определены тест-системой. Из этого следует логичный вывод, что микроорганизма в теле нет.
Однако стоит учитывать, что несмотря на всю свою высокую чувствительность и специфичность, методика имеет определенный порог чувствительности. Если концентрация возбудителя на момент обследования не переходит границу этого порога, результат будет расцениваться, как отрицательные. Хотя на самом деле окажется ложным до поры до времени.
Доктора акцентируют особое внимание на том, что отрицательный результат не всегда означает отсутствие патологии. Чтобы на 100% быть уверенным в своем здоровье, пройти исследование повторно рекомендуется через несколько недель, а порой и месяцев.
Часто среди пациентов звучит вопрос о том, какой врач будет проводить расшифровку ПЦР исследования.
В первую очередь необходимо запомнить, что доверять результаты стоит тому же медицинскому работнику, что первоначально давал направление на исследование. Связана эта рекомендация с тем, что в этом случае доктор будет представлять себе, что он ожидает увидеть в анализах. Сможет грамотно интерпретировать итоги, соотнося их с клинической картиной.
Получить направление наиболее часто можно от уролога, гинеколога или венеролога. Соответственно, после получения итогов относить бланк с результатами стоит кому-то из них. Важно помнить, что ПЦР – довольно дорогой метод диагностики. Его не принято использовать просто так, без специальных показаний к обследованию.
Среди них:
Часто пациенты задают на приеме у медицинского работника вопрос о том, когда результаты ПЦР крови и мазков становятся положительными после заражения. Все зависит от того, насколько быстро конкретная инфекция сможет, размножаясь, пройти пороговую для теста концентрацию в материале.
Преимуществом ПЦР является то, что порог чувствительности у теста довольно низкий. Это значит, что выявить признаки заражения можно даже в том случае, если количество возбудителя в биологическом материале будет минимальным.
Подобная особенность дает возможность постановки диагноза даже в период инкубации, когда симптомы еще полностью отсутствуют.
Однако осечка возможна и при применении ПЦР методики. Это происходит, например, если пороговая концентрация все же не успела достичь определяемых тестом значений. В этом случае велика вероятность получения далеких от правды результатов.
Вопрос о том, как выглядит бланк результатов анализов ПЦР, весьма актуален.
Как отмечают доктора, ничего сложного во внешнем виде бумаги нет. Зачастую на документе можно обнаружить название искомого возбудителя. А напротив него пометку «обнаружен» или «не обнаружен».
В первом случае пациенту рекомендуется озаботиться собственным здоровьем. Так как анализ расценивается как положительный, а человек, как зараженный. Следовательно, ему требуется терапия.
Во втором случае чаще всего состояние пациента оценивают, как здоровое, хотя могут быть и исключения. Важно помнить, что количество возбудителей, указанных на бланке, зависит во многом от того, какое конкретно вид анализа применялся.
Если проводился поиск только одного патогенного микроорганизма, в результате будет фигурировать только его название с соответствующей пометкой. Если ПЦР проводилось сразу на несколько инфекций, что тоже возможно, в бланке будет список патологий с пометками.
Сегодня в лабораториях при комплексном анализе на группу инфекций не принято выдавать на каждый патогенный микроорганизм отдельный бланк. Их все указывают на одном листе.
Часто пациенты интересуются вопросом о том, возможно ли получение ложных результатов обследования при использовании методики. К сожалению, как отмечают врачи, ошибки хоть и редко, но случаются.
Существует, например, вероятность получить ложноположительные результаты ПЦР сразу после лечения. Объясняется это очень просто.
Терапия уже окончена, возбудитель удален из организма и не может заражать новые ткани. Однако остатки ДНК или РНК еще могут циркулировать в крови или ином диагностическом материале. В этом случае тест-система будет улавливать их и воспринимать за полноценную патологию, выдавая ложноположительный итог.
Именно поэтому рекомендуется после терапии сдавать исследование несколько раз с разными промежутками времени. Только в этом случае итоги будут достаточно объективными.
Ложноотрицательные результаты анализов ПЦР после приема антибиотиков также возможны. Происходит это в том случае, если пациент, неверно используя препараты антибактериального ряда, смазал симптомы болезни.
Не позволил микроорганизму активно размножаться в теле, но при этом и не довел его уничтожение до конца. В этом случае количество возбудителей может упасть ниже пороговой концентрации чувствительности. Это и даст неверные результаты тестирования.
С помощью метода ПЦР доктора нередко подтверждают или, напротив, опровергают результаты других методов обследования, используемых для диагностики ИППП.
Например, с этой целью может использоваться ИФА.
Бывает так, что ПЦР отрицательный, а ИФА положительный. Тогда больной оказывается в замешательстве относительно своего состояния.
Доктора рекомендуют не теряться, а сначала провести оба теста повторно. Если ИФА останется положительным, а ПЦР отрицательным, с большой вероятностью заболевание в организме пациента отсутствует.
Ведь иммуноферментный анализ направлен на реакцию антиген-антитело. И порой может принимать сходные по структуре антигены других возбудителей за искомый, выдавая ложноположительные результаты.
Вероятность того, что ИФА дало верный результате на второй раз, а ПЦР, напротив, выдало ошибку, например, из-за низкого титра возбудителя, сведена к минимуму. Это скорее казуистика, чем реальная клиническая практика.
Результаты ПЦР диагностики обладают высокой ценностью в диагностике большого количества различных патологий. В первую очередь методика является незаменимой при подозрении на различные ЗППП.
Если вам нужно сдать получить комментарии по результатам ПЦР, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.
onvenerolog.ru
ПЦР анализ, что это такое знают не многие, хотя сегодня это один из инновационных методов диагностики инфекционных заболеваний, за который его разработчик 1993 году получил Нобелевскую премию. Этот высокотехнологический метод позволяет обнаружить серьезные заболевания на начальной стадии и своевременно начать их лечение.
Анализ основан на принципах молекулярной биологии. Исследование методом ПЦР заключается в использовании особого фермента, что под воздействием температурных режимов, копирует РНК и ДНК присутствующих в собранном биоматериале бактерий и вирусов. Такое массовое размножение дает возможность врачу в точности определить, к какому виду принадлежит бактерия, спровоцировавшая недуг, а также измерить уровень ее концентрации в биоматериале. Проводится процедура копирования в специальном аппарате – амплификаторе, который нагревает и охлаждает пробирки с собранным материалом, создавая удобное условия для репликации.
ПЦР исследование проводят по многим причинам, но чаще всего его используют для определения наличия таких инфекционных болезней как:
ПЦР анализ не ограничивается сферой применения в медицине, не редко скрининг делают, если необходимо понять, кому принадлежит биологический материал, найденный на месте преступления, то есть ПЦР анализ массово применяют в криминалистике. Требуется отметить, что мазок или кровь на ПЦР берут, если требуется установить отцовство. Результаты ПЦР диагностики ничем не уступают привычному анализу на ДНК родство, да и стоит намного дешевле.
Что показывает при беременности общий анализ крови?34451Анализ методом ПЦР обладает огромным количеством положительных сторон. В первую очередь, важно отметить чувствительность теста. ПЦР анализатор способен определить молекулы ДНК бактерий даже при их малом количестве, то есть врач получает информацию о ранней стадии заболевания или начале хронической формы недуга. Анализ крови ПЦР способен даже определить наличие инфекционного заболевания, что находится в латентной форме и ничем себя не выдает.
Требуется отметить, что анализ ПЦР у мужчин и у женщин может быть проведен при наличии любого типа материала, это не обязательно должна быть кровь или мазок, подойдет слюна, клетки кожи и даже моча.
Результаты анализов ПЦР могут быть обширными, так как ПЦР диагностика инфекций может отхватить сразу несколько возбудителей заболеваний, что находятся в одном образце биоматериала. Обследование можно пройти в любое удобное время, что показывает анализ человек может узнать за короткий промежуток времени, так как результаты диагностики биоматериала готовы уже через 5 часов.
Все врачи сходятся во мнении, что анализ крови на ПЦР или другого материала никогда не дает ложные результаты, если правильно соблюдена методика проведения диагностики. ПЦР положительный или ПЦР отрицательный может быть ложным, только при условиях, что лабораторные сотрудники не обладают высоким уровнем профессионализма. Если изъятый биоматериал был загрязнен или его неправильно хранили, то расшифровка анализа ПЦР может иметь искаженные результаты.
Мазок на ПЦР у женщин из шейки матки берут, если требуется определить заболевания, передающиеся половым путем, к примеру, хламидии, уреаплазымы или герпес. Если ПЦР требуется провести на эти бактерии мужчине, то у него берется выделение из уретры — сок простаты, проще говоря. Кровь методом ПЦР исследуют, если хотят определить гепатит, токсоплазмоз и ВИЧ. Делается анализ ПЦР на мононуклеоз и цитомегаловирус путем изъятия мазка из зева. Полимеразную цепную реакцию на наличие легочных инфекций проводят с наличием такого биоматериала, как мокрота или плевральная жидкость.
ПЦР при беременности делают, если есть подозрение на наличие внутриутробных инфекций, а также болезней и патологий нервной системы плода. В качестве биоматериала для исследования берут у беременной ткани плаценты. Если у человека поражение нервной системы, исследуют спинномозговую жидкость. Для определения такой бактерии как хеликобактер пилори, используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки.
Анализ мочи ПЦР тоже используется нередко, но он менее предпочтителен нежели анализ крови. Он позволяет увидеть наличие патогенных микроорганизмов, что провоцируют инфекционные заболевания, но не может указать точное их количество и степень развития недуга. ПЦР мочи используют, если нет возможности по каким-то причинам изъять кровь или сделать мазок. Также требуется отметить, что ПЦР мочи может проводиться для исследования инфекций у маленьких детей. Анализ мочи позволяет также определить наличие инфекции и воспаления в мочевом пузыре, определить камни, песок, а также цистит и уретрит.
Многие даже не догадываются, что сделать анализ можно с помощью кала, конечно показывает этот тип исследования исключительно наличие паразитов в организме, а также наличие яиц, что остались после выведения взрослой колонии. Анализ кала покажет, сколько именно есть глистов в образце, это позволит определить степень поражения организма. А также врач сможет подобрать препарат, чувствительный к выявленному штамму паразита.
Как уже выше упоминалось, сдать анализ на ПЦР можно при наличии любого биоматериала. ПЦР анализ, что это такое, вам известно, требуется знать еще и подготовку к диагностике. От того, что предстоит изъять, напрямую зависит подготовка, к примеру, сдавать мочу нужно после тщательной гигиены половых органов в утреннее время. Кровь сдают натощак, во время сдачи вернее, накануне, необходимо отказаться от употребления любых медикаментозных препаратов. Если имеются хронические недуги, то список разрешенных препаратов для употребления решается индивидуально, лечащим доктором.
Анализ кала сдают в утреннее время после тщательной подготовки. Накануне сдачи, необходимо отказаться от тяжелой пищи и провести тщательную гигиену половых органов. Анализ кала будет недостоверным, если биоматериал был изъят с помощью клизмы, необходимо естественное нисхождение материала. Подготовка к сдаче слюны не требуется, достаточно оказаться от курения, употребления цитрусового сока.
Перед сдачей биоматериала на определение заболеваний, что передаются при сексе, пациентам требуется исключить половые контакт за два дня до ПЦР диагностики. Женщинам сдавать мазок из шейки матки запрещено во время критических дней через два дня после месячных, иначе ПЦР расшифровка будет иметь искаженные сведения.
Детально объяснить, что такое анализ ПЦР говорит о состоянии того или иного пациента, может исключительно квалифицированный врач, самостоятельно понять данные, указанные в бланке, будет непросто. Если вы попросите доктора-расшифруйте данные, то он в первую очередь скажет, положительный результат или негативный. Если анализ негативный — значит человек здоров, и никаких бактерий в исследуемом материале не обнаружено. В случае с положительным результатом, указывается точный тип возбудителя и его количество, можно узнать также точный период, когда было заражение по наличию определенных иммуноглобулинов.
Какие существуют анализы крови?1906Существует несколько классов иммуноглобулинов, что могут четко отобразить состояние пациента:
Есть ряд случаев, когда анализ показывает положительный результат, но человек и вовсе не чувствует себя плохо. Это вовсе не говорит об ошибки проведения диагностики, скорей имеет место хроническая форма недуга, которая находится в спящем состоянии или же развитие болезни только начинается. В это время нет достаточного количества бактерий, что могут спровоцировать симптоматику.
Теперь принцип анализа вам известен, и вы сможете обратиться за данной диагностикой, если появится наименьшее подозрение на инфекционное заболевание. От того, насколько быстро вы пройдете диагностику, которая является практически безболезненной, напрямую зависит длительность дальнейшего лечения и его эффективность. Чтобы постоянно поддерживать свое здоровье на хорошем уровне, рекомендовано раз в году проходить профилактическую ПЦР диагностику на наличие ЗПП, а также инфекций других органов. Лучше предупредить заболевание, чем потом бороться с его последствиями.
1diagnos.ru
Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) – это одно из самых ярких достижений в сфере молекулярной биологии. Метод получил широчайшее распространение в разных областях науки. Благодаря очень высокой специфичности и чувствительности, метод ПЦР применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека.
Для анализа методом ПЦР можно использовать любые биологические материалы, которые содержат нуклеиновые кислоты (молекулу ДНК или РНК).
У каждого живого существа, по крайней мере, на нашей планете, есть уникальный «отпечаток» - ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), которая отвечает за передачу наследственных факторов от предков к потомкам. Структурно эта молекула представляет собой две нити из молекул-азотитых оснований, удерживаемые рядом друг с другом химическими связями и скрученные в спираль (считается, что для компактности). Из курса биологии вы можете помнить такие названия, как аденин (А), гуанин (Г), тимидин (Т) и цитозин (ц). Это 4 нуклеотида, которые и создают последовательность ДНК. Вирусы хранят свою генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК.
Информация об уже изученных ДНК и РНК хранится в научных базах лабораторий. После того, как был изобретен метод ПЦР, для многих возбудителей различных заболеваний (бактерии, грибки и вирусы) были созданы свои специфические генетические детекторы (праймеры) - уникальные последовательности нуклеотидов, характерных только для конкретного возбудителя. И если поместить их в пробирку с исследуемым материалом, при наличии в нем ДНК или РНК «живых» возбудителей, праймеры запускают реакцию репликации – создания огромного числа копий, которое можно идентифицировать визуально. Т.е. они начинают копировать свою ДНК/РНК десятки раз.
И при подсчете результатов сотрудники лаборатории могут понять, есть ли искомые бактерии и вирусы в исследуемом образце, или нет, именно поэтому результаты ПЦР чаще всего качественные, т.е. «обнаружено» или «не обнаружено».
Со слов американского биохимика Керри Мюллиса (Kary Mullis), идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода (ДНК) пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга (Arthur Kornberg), которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества.
Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры. И потом останется просто искать эти участки в диагностическом материале.
В итоге, корпорация CETUS, в которой работал Мюлис, выделила ему команду ученых. И в 1985 году, в издании Американского общества генетики человека, появилась публикация с теоретическим обоснованием ПЦР, как метода идентификации генетического материала живых организмов.
Сначала пробу биологического материала подготавливают: центрифугируют, осаждают и т.д. Затем лаборантам необходимо выделить ДНК из полученного биологического концентрата.
Амплификация (увеличение числа копий ДНК)
Важнейший этап исследования. Проводится в термоциклере и именно здесь проходят все процессы, подпадающие под определение полимеразно-цепная реакция: денатурация, отжиг, элонгация.
Денатурация
Самый первый этап – развернуть (денатурировать) нуклеиновые кислоты, чтоб сделать их доступными для дальнейшей работы. Осуществляется путем нагрева реакционной смеси до 80-90 °C.
Отжиг
Денатурированные (распущенные) ДНК/РНК обрабатывают праймерами - изготовленными в лабораторных условиях коротенькими цепочками нуклеиновых кислот. Благодаря запрограммированному участку, праймеры прикрепляются только к тем нуклеиновым кислотам, для которых были созданы. Например, праймер для вируса простого герпеса 1 типа, никогда не свяжется с ДНК другого вируса, микроорганизма или клетки.
Именно праймеры обусловливают крайне высокую специфичность ПЦР – способность реагировать только на нуклеиновые молекулы конкретных типов, видов классов и даже штаммов микроорганизмов. Или отдельные виды клеток живых организмов.
Или синтез. После завершения процесса отжига, в реакционной смеси создают условия для активности полимеразы. Фермент, ориентируясь на молекулы праймеров (а не исходных нуклеиновых кислот), начинает синтез новых ниток ДНК/РНК. Которые становятся копиями исходных, искомых молекул нуклеиновых кислот.
Такой температурный цикл проводится 30 и более раз. В результате, даже при изначально небольшом количестве искомого генетического материала, в реакционной смеси накапливается значительное число «помеченных» праймерами нуклеиновых кислот (растет экспоненциально, с удвоением при каждом цикле).Обнаружить большие количества ДНК/РНК намного проще, за счет чего реализуется еще одно преимущество ПЦР – высочайшая чувствительность.
Оценка результатов ПЦР проводится несколькими путями:
Всего разработано более 10 разных методик амплификации, применяемых лабораториями в зависимости от исходных условий и поставленных целей.
Общим для них есть высокая чувствительность (для положительного результата достаточно 40 (!) или менее искомых копий ДНК в 1 мл образца, то есть вероятность ложноотрицательного ответа ничтожно мала. И очень высокая специфичность: вероятность ложноположительного ответа составляет менее 1%.
Но точность результатов сильно зависит от качества сбора диагностического материала, тщательного соблюдения всех технических требований к каждому этапу и качеству оборудования, расходных материалов (буфера, праймеров, раствора для отмывки и т.д.).
В дерматовенерологии ПЦР используют для выявления венерических заболеваний: микоплазменной, хламидийной инфекций, сифилиса, генитального герпеса и др.
Инфекционисты активно используют ПЦР для диагностики туберкулеза, ВИЧ, вирусных гепатитов, герпеса, мононуклеоза, вируса Эпштейн-Барр и др.). А с помощью ПЦР в реальном времени, оценивая вирусную нагрузку, врачи могут составить мнение о динамике заболевания, отклике на лечение, что особенно актуально для пациентов с ВИЧ, принимающих терапию.
Также благодаря ПЦР врачи могут в течение нескольких дней с уверенностью идентифицировать коклюш и паракоклюш, выявить возбудителей эпидемии ОРВИ. Уточняются типы вируса гриппа, циркулирующие на определенной территории, на основании чего появляется возможность разработать эффективную вакцину для каждого сезона гриппа.
В течение суток или быстрее можно установить вид возбудителя кишечной инфекции, а значит – назначить адекватное лечение и обнаружить вероятный источник заражения.
Летом, ПЦР актуальна для диагностики заболеваний, передаваемых иксодовыми клещами: боррелиоза (болезни Лайма), клещевых энцефалитов.
Метод позволяет работать с любым биологическим материалом. Гемотрансмиссивные инфекции (сифилис, ВИЧ, гепатиты, боррелиоз) исследуются по пробе венозной крови или спинномозговой жидкости. Кожные болезни (герпес, грибки) – по соскобу с пораженного участка. Венерические и урологические – по образцу мочи, спермы, влагалищного отделяемого.
Так что в медицине, ПЦР применяется везде, где нужна высокая точность и быстрота получения результатов.
Лабораторные исследования, выполняющиеся методом ПЦР:
пцр диагностика на Инфекции:
www.labquest.ru
Нечасто возникает ситуация, когда за разработку технологии научного исследования, которое потом широко применяется в клинической практике, автор получает Нобелевскую премию. Но именно так произошло с Кэрри Муллисом, который в 1993 году получил Нобелевскую премию по химии. Итогом его многолетних исканий явился метод полимеразной цепной реакции или ПЦР. Что это такое? Почему этот способ изучения молекулярных структур так широко стал применяться в медицине, хотя в науке он считается экспериментальным способом? Чтобы разобраться в этом, нужно вспомнить, что такое геном.
Известно, что каждое живое существо на планете обладает определенным набором наследственной информации, которая передается от поколения к поколению. У человека это информация зашифрована в 46 хромосомах, у других живых существ, как животных, так и растений, существует иное количество хромосом. Но в каждой хромосоме содержатся очень компактно скрученные нити ДНК – дезоксирибонуклеиновой кислоты, которая является гигантской молекулой «биологической памяти».
Именно молекула ДНК хранит закодированную информацию о структуре живой ткани, а точнее — о белках, которые должны синтезироваться. По сути, ДНК представляет собой матрицу, на которой один за другим располагаются участки, отвечающие за синтез отдельных белков. У каждого живого существа есть свои собственные, уникальные участки этой молекулы, которые не встречаются у другого вида: белки строго видоспецифичны, а их определенная последовательность также уникальна. Как же можно воспользоваться этой структурой в диагностических целях?
В том случае, если проводится анализ крови ПЦР методом, то можно выделить наследственный материал тех живых существ, которые оставили свои следы в организме человека. Конечно, прежде всего, это возбудители различных инфекционных заболеваний: вирусы и бактерии, грибы и простейшие, другие патогенные формы жизни.
Вся сложность состоит в том, что если в организм человека попало определённое количество возбудителей, например, бактерий, и организм их уже успела разрушить, то в плазме крови сохраняются незначительные обрывки наследственной информации.
Эти обрывки и остатки содержат, в том числе, фрагменты тех самых уникальных последовательностей ДНК, но их нужно каким-то образом сделать узнаваемыми. Как же получить выявляемые участки генома, которые можно подвергнуть дальнейшему исследованию, и дать ответ, находится ли данный возбудитель в организме, или его остатки? Для этого и разработан метод полимеразной цепной реакции, или анализ крови на ПЦР в медицине. В чём суть метода?
Полимераза — это особый фермент, который в соответствующих условиях может многократно умножать, или амплифицировать заданный участок ДНК, копируя его много раз. Этот метод напоминает человека, который вошел в темную комнату с зеркальными стенами, и зажег в ней фонарик. Многократное отражение луча от стен делает комнату светлой, хотя луч из фонарика по-прежнему выходит один. Также и фермент ДНК полимераза, позволяет многократно увеличить количество наследственного материала, делая его концентрацию доступной для определения.
Сама технология этой реакции — достаточно тонкий процесс. В начале необходимо задать точную температуру, которая измеряется десятыми долями градусов. Материал, в котором, возможно, находится наследственный материал возбудителей, нагревают до высокой температуры, чтобы разрушить водородные связи внутри двухцепочечной структуры ДНК.
Затем добавляется в раствор ДНК полимераза, особые праймеры, которые крепятся к свободным концам фрагментов ДНК, откуда и начинает работать полимераза, туда же добавляются нуклеотиды — аденин, гуанин, цитозин и тимин, и проводятся определенный технологические процедуры. В результате на выходе образуется гораздо больше копий с заданными параметрами, чем на входе этой реакции. Если ДНК полимераза успешно справилась с заданием, то многократно умноженный и достроенный фрагмент сверяется с необходимой базой данных, и затем делается заключение о наличие в организме определённого возбудителя.
Не стоит думать, что анализ крови на ПЦР и применение ее в медицине является единственным. Различных способов исследовать наследственный материал методом ПЦР существует много. Насчитывается более 10 разновидностей полимеразной цепной реакции, например, инвертированная, ступенчатая, с обратной транскрипцией, ПЦР длинных фрагментов, и даже виртуальная ПЦР. Последняя разновидность есть не что иное, как математический метод компьютерного моделирования, который проводится для предсказания достоверности будущих реакций.
В современной практике полимеразная цепная реакция с успехом применяется в криминалистике, если на месте преступления оставлены биологические материалы. Если есть подозреваемый, то нет никаких проблем с идентификацией принадлежности материала конкретному лицу.
ПЦР диагностика помогает выявить отцовство, а также применяется для клонирования генов, которая необходима в современной медицине для создания моноклональных антител. Они перспективны как способ лечения лечения злокачественных новообразований, рассеянного склероза, и многих аутоиммунных болезней. Также это реакция применяется в генетике для секвенирования ДНК, а также для экспериментального мутагенеза, или внесения необходимых исследователям изменений в избранный геном.
Расшифровка анализа крови, выполненного методом ПЦР, позволяет быстро и с высокой достоверностью определить наличие в организме пациента возбудителей очень многих заболеваний, которые не растут на искуственных средах. Чаще всего к ним относятся различные вирусы и «капризные» микроорганизмы. Это вирусы папилломы и клещевого энцефалита, цитомегаловирусная инфекция и туберкулез, вирусные гепатиты и мононуклеоз, герпетическая инфекция и ВИЧ-инфекция, микоплазменная и хламидийная инфекция.
Что показывает анализ? Практически всегда он выполняется качественно, и в заключении дается ответ, есть в образце наследственный материал определенного возбудителя, или его нет, человек заражен, или инфицирования не выявлено. Иногда проводится количественное определение, но оно выполняется реже и стоит дорого дороже.
Большим преимуществом является то, что сдавать кровь на ПЦР вполне можно безо всякой подготовки, в отличие от изучения многих биохимических показателей. Кровь сдается, как обычно, без сложностей. В начале XXI века метод ПЦР — золотой стандарт диагностики различных инфекций. Но, как и у любого способа, у метода ПЦР имеются плюсы и минусы.
Безусловными плюсами этого метода является широкая универсальность. Он может обнаружить очень многих возбудителей, исследовать можно любой биоматериал, от соскобов и до биоптатов тканей, от крови и слюны до мочи и спермы. При необходимой подготовке в одном образце можно сразу поставить реакцию на выявление нескольких возбудителей, провести групповое определение.
Метод ПЦР очень чувствительный, и даже если в исследуемом образце находится всего лишь несколько обрывков ДНК, то можно определить даже раннюю стадию заболевания, включая даже день заражения. Это реакция показана для выявления латентной инфекции, которая никак себя не проявляет, в том числе, если у пациента на фоне иммунодефицита не синтезируются антитела.
Метод ПЦР позволяет проводить быструю диагностику, и уже на следующий день после сдачи анализов получить результат. Наконец, ПЦР — диагностика отличается высокой достоверностью, точностью, и, как показала практика, небольшой стоимостью. Последнее качество очень важно, поскольку при поиске различных инфекций пациенту приходится платить сразу за постановку реакций для поиска нескольких возбудителей. Поэтому количество ПЦР-исследований в каждой крупной лаборатории очень велико.
Но не существует совершенных методов исследования. Следует помнить, что далеко не каждая лаборатория может себе позволить проведение анализов ПЦР. Необходим специальный прибор, в котором ставится реакция, и он называется амплификатор. Профессионализм специалистов лаборатории должен быть очень высоким, соблюдение технологии — безукоризненным, а чистота в лаборатории должна быть абсолютной. Также предъявляются высокие требования к чистоте и исходного образца. В том случае, если берется кровь, то необходимо тщательно обработать кожу, иначе в кровь могут попасть частицы микроорганизмов, которые находятся на ее поверхности. Это же относится и к другим образцам, например, смывам из носоглотки, или к вагинальным мазкам.
myanaliz.ru